内部標準法(Internal standard method)
Internal standard method 検量線と定量
目的成分のピークの近くに現れ、他の成分を妨害しない成分を内部標準として選択します。
次に、種々の目的成分と一定濃度の内部標準を含む標準試料を調製し、クロマトグラムの測定をします。
得られた目的成分と内部標準についてのピーク応答量の比と濃度(重量)比を用いて検量線を作成します。
次に、未知試料に一定量の内部標準物質を添加したクロマトグラムを測定し、検量線を用いて目的成分と
内部標準のピーク応答量の比と濃度(重量)比から濃度(重量)を求めます。
1点検量線
検量線の傾き→FACTOR 1 = (W1A / WIS) / (VRA / VRIS)
切片→FACTOR 2 = 0
W1A→標準試料1のA成分の濃度(重量)
WIS→標準試料1の内部標準の濃度(重量)
VR1A→標準試料1のA成分のピーク応答量(面積または高さ)
VRIS→標準試料1の内部標準のピーク応答量(面積または高さ)
※A→未知試料A(Unknown Sample A)
※IS→内部標準(Internal Standard)
※W→重量(Weight)
※VR→応答量(Volume Response)
2点検量線
検量線の傾き→FACTOR 1 = VRIS(W2A - W1A) / WIS(VR2A - VR1A)
切片→FACTOR 2 =(W1A x RV2A - W2A x RV1A) / WIS(RV2A - RV1A)
W1A→標準試料1のA成分の濃度(重量)
W2A→標準試料2のA成分の濃度(重量)
WIS→標準試料1,2に添加した内部標準の濃度(重量)
VR1A→標準試料1のA成分のピーク応答量(面積または高さ)
VR2A→標準試料2のA成分のピーク応答量(面積または高さ)
VRIS→標準試料1,2に添加した内部標準のピーク応答量(面積または高さ)
※A→未知試料A(Unknown Sample A)
※IS→内部標準(Internal Standard)
※W→重量(Weight)
※VR→応答量(Volume Response)
定量値
XA = { (FACTOR 1)A x (VRA / VRIS) + (FACTOR 2)A } x WIS x SF
(FACTOR 1)A→A成分の検量線の傾き
(FACTOR 2)A→A成分の検量線の切片
VRA→未知試料のA成分のピーク応答量(面積または高さ)
VRIS→未知試料に添加した内部標準のピーク応答量(面積または高さ)
WIS→未知試料に添加した内部標準の濃度(重量)
SF→スケールファクター
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